固相萃取（SPE）方法
1、固相萃取（SPE）柱的选择：
三聚氰胺呈弱碱性（弱阳离子化合物），净化过程一般选择阳离子交换柱。混合型的阳离子交换柱（PCX）通过将磺酸基团键合在极性高聚物苯乙烯/二乙烯苯（PEP）吸附剂上，具有阳离子和反相两种吸附机理，并具有以下优点:
1）可通过两种不同溶液的洗涤（水/一定PH值的缓冲溶液和有机溶剂），使样品 更干净，提高检测的灵敏度。
2）批次重复性好。
3）回收率高，重现性好，即使小柱跑干也可以得到较高回收率。
2、样品前处理步骤：
2.1 标准样品配制：
取50mg三聚氰胺标准品，以20%甲醇溶解定容至50ml得到1000ppm的标准溶液，使用时，以提取液（1%三氯乙酸）稀释至所要的浓度。
2.2 提取：
称取饲料/奶粉样品5g（或牛奶10ml），加入50ml 1%三氯乙酸提取液，充分混匀，加入2ml 2%乙酸铅溶液，超声20min。然后取部分溶液转移至10ml离心管中，8000rpm/min 离心10min，取上清液3ml过混合型阳离子交换小柱（PCX）。
2.3 净化（PCX小柱，60mg/3ml）：
1）活化及平衡：3ml甲醇，3ml水
2）上样：加入提取液3ml
3）淋洗：3ml水；3ml甲醇；弃去淋洗液并将小柱抽干。
4）洗脱：5ml 5%氨化甲醇（v/v）洗脱。（5%氨化甲醇的配制：5ml氨水+95ml甲醇）。
5）浓缩：50摄氏度，氮气吹干，20%甲醇/水定容至2ml。
2.4 检测：
用HPLC-UV 中国农业部颁标准检测方法分析，测得PCX柱的回收率结果如下：
添加水平（mg/L） 回收率
空白
0.01 116%
0.1 108%
0.5 92%
2 96%
可以看出：用PCX柱净化样品，可以得到满意的回收率。 |
